近年来随着分子生物学技术的普及,应用先进的仪器设备直
接检测病毒核酸成为生产中高度敏感与特异的检测手段。检测病
毒常用的分子生物学检测技术主要包括多聚酶链反应(Polymer—
ase chain reaction,PCR)和核酸探针杂交两种。
1.多聚酶链反应 这是一种体外基因扩增法。先将待检标
本DNA热变性为单股DNA作为模板,加一对人工合成的与模板
DNA两端一段核苷酸序列互补的引物,在耐热DNA多聚酶作用
下,使4种脱氧核苷按模板3端引物向5端延伸DNA链,经28~
30个循环,可使1个拷贝的核酸扩增至106个以上,经琼脂糖电
泳,可见到溴化乙锭染色的核酸条带,扩增片段的大小取决于两引
物的间距。此法较核酸探针杂交敏感、快速,已用于大多数鸡病的
感染诊断,尤其适用于不易分离培养及含量极少的病毒标本,有较
大应用前景。
2.核酸探针杂交核酸探针杂交具有高度敏感性和特异性,
常用于检测样本中的病原。斑点杂交是首先将标本滴加到硝酸纤
维素膜上,病原DNA结合到膜上,在原位进行碱变性处理后,将
膜浸泡于含有标记的已知病原DNA片段作为核酸探针的杂交液
中,两条单股核酸按碱基互补配对原则结合成双股,经放射自显影
或酶促反应显色,阳性结果出现斑点状杂交信号