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猪病微生物学检查之病料的采集和病料涂片镜检方法

  运用兽医微生物学的方法进行病原检查是诊断猪传染病的重要方法之一。一般常用下列方法和步骤。
       病料的采集  正确采集病料是微生物学诊断的重要环节。病料力求新鲜,最好能在濒死时或死后数小时内采取,尽量要求减少杂菌污染,用具器皿应经煮沸或干烤消毒。通常可根据所怀疑病的类型和特性来决定采取哪些器官或组织的病料,如猪瘟可取淋巴结和脾脏;猪丹毒时取肾、脾或肝.口蹄疫、水痘病等则取水泡皮和水泡液。原则上要求采取病原微生物含量多、病变明显的部位,同时易于采取、易于保存和运送。
     病料涂片镜检  病变的组织器官可先用无菌镊子夹住组织的一端,再用灭菌剪刀剪下一小块组织,将留在镊子上的组织块切面于玻片上轻轻触压下,让其在玻面上留下一个该切面的痕迹-井依此连续作5~6个压迹,这类标本片称为组织触片;所用台苗材料若是液体(如渗出液、血液、尿液、乳汁等)可直接用灭菌接种环取材料一环.置玻片上均匀涂布成适当大小的薄层,并用火焰烧去环上多余材料。制成的涂H让其在空气中自然干燥。然后将干燥涂片的背面在酒精灯火焰上缓缓通过数次.略作加热固定(热度以玻面温度略烫手为宜)。固定后的涂片,可直接取染色液滴加在玻片上,使之盖满整个涂面。染色结束后,用水洗去染液.直立玻片晾干或放在两层滤纸中轻轻吸干(切不可将玻片在滤纸间移动,以免擦掉涂面),即可镜幢。根据被检材料与检查目的不同,可采用不同的染色方法。常用的染色法有骆氏美蓝染色和革兰氏染色。
       骆氏美蓝染色  以美蓝饱和酒精30毫升加O.01%氢氧化钾溶液100毫升,即配成染色液。将染色液滴于触片或涂片上,约染2分钟,再用清水冲洗,滤纸吸干,即可镜检。
       革兰氏染色第一步将结晶紫染液(取10%结晶紫酒精溶液20毫升加1%草酸铵水溶液80毫升)滴于触片或涂片上,经1分钟后,水洗;再以碘溶液(碘片1克、碘化钾2克、蒸馏水100毫升配成)滴于片上,作用1分钟,水洗。第二步加95%酒精于片上,并轻轻摇动玻片,直至无色素从涂面上脱下为止,约半分钟,充分水洗。第三步用中性红溶液(中性红1克、1%醋酸2毫升、蒸馏水1000毫升,复染1~2分钟,水洗,滤纸吸干,即可镜检。革兰氏阳性菌呈紫色.革兰氏阴性菌呈红色。
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