当两只蜘蛛放在同一容器中，尤其是两只雄性蜘蛛，就会发生争斗或残杀。因此，鉴别蜘蛛的雌雄是做好蜘蛛繁殖的重要环节。以下以捕鸟蛛为例，介绍鉴别雌雄的方法。
1、颜色
雄性蜘蛛身体的颜色一般都比较鲜艳，并富有光泽；身体鲜艳是雄性表现自己，求得配偶“钟爱”的一种行为体现。而雌蜘蛛的身体颜色相对雄性蜘蛛则显得暗淡。
2、体型
一般雌性蜘蛛的个体较大，触肢和步足粗壮有力，因此显得魁悟雄壮；而雄性蜘蛛相对雌性蜘蛛个体小，腹部小，步足瘦且长，身体也显得瘦长。
3、触肢器
雌性蜘蛛的触肢发育正常，而雄性蜘蛛的触肢、跄节膨大后为触肢器雄性蜘蛛的触肢末端有一个红宝石状的物体。
4、生殖孔
雌蜘蛛的生殖孔都开口于生殖沟的正中，但雌性蜘蛛生殖孔外有一个盖板，雄性蜘蛛则没有盖板。