谈及大王蛇的繁殖，必须先得从蛇的雌雄之分、交配和性别配比说起。
大王蛇自幼体到性成熟，通常要经过2～3年的时间。一般来说，大王蛇性成熟的规律是：雄性蛇较雌性蛇早，小型蛇比大型蛇早，热带蛇比寒带蛇早，无毒蛇比有毒蛇早。毒蛇大多要3～4年性器官基本发育成熟，比无毒蛇至少要晚1～2年。大王蛇达到性成熟时，为了养殖的需要，必须鉴别蛇的雌雄，鉴别方法如下：
雄蛇靠近肛孔的一段，即尾基部稍微有些膨大，这是因它的交接器位于这里的缘故，尾巴的比例也稍长些，雌蛇尾巴相对的短些，自肛孔后骤然变细。一般雄蛇的腹鳞较雌蛇少，而尾下鳞则比雌蛇多些。此外，不同种类的蛇，雌雄两性也有所不同，如水蛇、虎斑游蛇等。在极个别的情况下，有的种类体色还有所不同，如竹叶青、赤链蛇等。最可靠的是挤压肛孔来区分，此法对鉴别幼蛇性别同样适用。前面已有介绍，在此就不重述。
雌蛇和雄蛇宜在交配期时放在一起，交配期过后则将它们分开。因为雄蛇一般比雌蛇个体大、性凶猛，还会与雌蛇争食，在食物出现严重不足或单一的情况下，它甚至吞食雌蛇，并干扰怀孕期雌蛇的休息。一条雄蛇可先后与数条雌蛇交配，而一条雌蛇与雄蛇交配一次后，能连续在3～6年内产出受精卵。为了蛇场内雌蛇有足够的交配机会，而又不失提供综合利用的大王蛇资源，蛇场内可多留雌蛇，而将雄蛇汰劣留壮。这样做对繁育质量好的幼蛇也有很大意义。一般来说，雄蛇数占雌蛇数的五分之一或八分之一即可。这样一方面可以提高交配时雄蛇的利用率，另一方面便于我们对蛇群更好的饲养和管理。
由于雌蛇在发情时，皮肤和尾基嗅腺能散发出一种具有强烈特殊气味的分泌物质，雄蛇会嗅此气味而追踪雌蛇。开始时，先是雄蛇追逐雌蛇，不时地伸出舌头，并不停地嗅雌蛇的身体，尤其是嗅其尾端的泄殖孔，该处有褐色的粘性分泌物渗出，具有特殊的气味，这对引诱雄蛇有很大作用。直径约半公里内的雄蛇会闻气味而至，通过气味能正确识别对方，这就是求偶行为。
处在发情中的雌雄两蛇相遇后，先是雄蛇伏于雌蛇背部，并用尾巴缠靠过去，待两蛇缠绕在一起，往往要经数次的反复才完成。不过，有时雌蛇会突然逃离或两蛇受到惊吓时而各自分开。或由此而造成的雌蛇大出血现象常有发生。这就是要求在人工饲养条件下，蛇场内或周围无噪音、无干扰的重要性。蛇交配，民间称做“蛇绞绳”，两蛇缠成之后，雌蛇一般伏地不动，尾部腹面略向雄蛇倾侧，雄蛇就会伸出交接器来(它虽有两条交接器，但交配时仅用其中的一条)，由体内翻出纳入雌蛇的泄殖肛孔。此时两蛇相互缠绕似油条状，彼此头部远离，但尾部始终是挨在一起的。若稍受惊扰，两蛇也是相当默契的同时移动。大王蛇交配持续时间不等，短则4～5小时，长则半天到一天。射精时雄蛇的前半部身体剧烈抖动，完成整个交配过程。只有两蛇交配受精后，雌蛇才会连续产下受精卵或仔蛇。
大王蛇的繁殖方式有卵生或卵胎生两种，而我们通常饲养的蛇种大多数是卵生繁殖的，如乌梢蛇、王锦蛇、赤链蛇、黑眉锦蛇、黄脊游蛇、金环蛇、银环蛇、眼镜蛇等。也有一部分蛇是卵胎生的，直接产下幼蛇，如蝮蛇、竹叶青、蝰蛇、水蛇等。各种大王蛇的交配或繁殖季节是各不相同的，大王蛇的交配状况全年都有，而产卵或产仔期则大多集中在6～10月份之间，以7～8月份居多。
对怀孕的雌蛇，不仅要给予充足多样化的食物，还需让它们静养，以利于卵或仔蛇的正常产出。凡健康的雌蛇，产卵或产仔大多在较短的时间内完成，一般约在一天内可产完；体质较弱者则可延至2～3天，甚至更久。健康蛇产出的卵大多卵型正常且孵化率高，体弱蛇所产的卵，大多卵壳较软或有畸型卵，孵化率明显降低。 ‘
对于饲养是为了取毒用的毒蛇，在产卵前半个月不能取毒，产后也应相隔15～20天左右。对于卵胎生的蛇种，产前、产后的一个月内均不应该取毒。否则，除容易引起非正常的死亡外，还会影响蛇卵(仔)及幼蛇的质量。
在饲养过程中，有些人担心多种无毒蛇的混养(王锦蛇除外)，会出现种类杂交的现象，其实这种担心是多余的。在野外环境中，蛇的种类虽然很繁多，但各自都保持种类的完全独立性。这是大王蛇繁殖习性与众不同的一大特点，始终存在着种类的生殖隔离。不同种类的蛇一般不进行交配，因此根本不存在杂交型的混种大王蛇。是否可以通过人工养殖来使其杂交，获取中间型的大王蛇呢?到目前为止尚未见到这方面的文字报道。