给奶牛人工授精，适宜的输精时间为发情开始后 12 小时左右或排卵前，一般掌握早晨发情傍晚输精，中午发情夜间输精，黄昏发情早晨输精。情期内输精 1~2 次，两次间隔 8~12 小时。输精时间过早，待卵子排出后，精子已衰老死亡；输精过晚，排卵后输精的受胎率又很低。所以使用冷冻精液输精的时间应当比使用新鲜精液适当推迟一些，输精间隔时间也应该短一些。
过去认为母牛产后生殖道恢复正常并可以配种的时间是产后 60 天。近年的研究标明，产后 35~40 天进行第一次配种，其受胎率为 45 ％，这样就可以缩短产犊间隔，增加终生产奶量。
奶牛人工授精中常出现的问题
输精枪不能顺利插入阴道 这种现象多是因为输精枪插入方向不对，受阴道壁弯曲所阻、母牛过敏、误入尿道或母牛抵抗、操作鲁莽引起。如果插入方向不对，可先由斜下方插入阴道 10 厘米，再向平或向下方插入（因为老龄母牛阴道松弛，多向腹腔下部沉降）如果是被阴道壁弯曲所阻，可用在直肠内的左手整理，向前拉直阴道。如果母牛过敏，可有节律地抽动左手或轻搔肠壁，以分散母牛对阴部的注意力。对于误入尿道的抽回后，使输精枪尖端沿阴道壁前进，即可拔出。
找不到子宫颈 多见于青年母牛、老龄母牛或生殖道闭缩的母牛。青年母牛子宫颈往往细小如手指，多在近处可以触到老龄母牛子宫颈粗大，往往随子宫沉入腹腔。须提出的凡是生殖道闭缩的母牛，如果检查骨盆前无索状组织（子宫颈）则一定是团缩在阴门最近处，可用手按摩，使之伸展。
输精枪对不上子宫颈口 输精枪多由左手把握，因被皱褶阻挡，偏入子宫颈外围或被子宫颈口内壁阻挡所致。操作者可将手臂稍后退，掌握住子宫颈口，防止子宫颈口游离下垂，随即自然导入。如有皱褶阻挡，需把子宫颈管前推，以便拉直皱褶。若偏入子宫颈外围，需退回输精枪，用左手拇指定位引导插入子宫颈口。若被子宫颈口内壁阻挡，可用左手持子宫颈上下扭动，扭转校对后慢慢伸入。
如何确定母牛的发情期
外部观察法
看外部表现：处于发情初期的母牛表现兴奋不安、反应敏感、哞叫，不接受其他牛爬跨。发情盛期则接受爬跨，被爬跨时举尾，四肢站立不动。进入发情末期，母牛逐渐转入平静期，渐渐地不再接受爬跨。看外阴的变化：母牛发情时，阴户由微肿而逐渐肿大饱满，柔软而松弛，继而阴户由肿胀慢慢消退，缩小而显出皱纹。看阴道黏膜和子宫颈口的变化：发情初期阴道壁充血而潮红，有光泽。发情盛期子宫颈红润，颈口开张，约能容纳一个手指。发情末期阴道黏膜充血、潮红现象逐渐消退，子宫颈口慢慢闭合。看阴户流出黏液的变化：发情初期排出的黏液比较清亮，像鸡蛋清，牵缕性差。发情盛期母牛阴户排出的黏液如玻璃棒样，具有高度的牵缕性，易黏着于尾根、臀端或后肢飞节处的被毛上。排卵前排出的黏液逐渐变白而浓厚黏稠，量也减少，牵缕性又变差。可用拇指和食指沾取少量黏液，若牵拉 5~7 次不断（距离 5~7 厘米）此时母牛已接近排卵，应在之后 3~4 小时输精，若牵拉 8 次以上不断者为时尚早，牵拉 3~5 次即断则为时已晚。看产奶量：大多数母牛在发情时，产奶量会有所下降。
直肠检查法
主要通过触摸卵巢和子宫的变化来进行鉴定。母牛发情初期，直肠检查子宫变软，卵巢一侧增大，卵巢上有卵泡，无弹性。此期维持 10 小时左右。发情中期直肠检查子宫松软，卵泡体积增大，直径 1~1.5 厘米，突出于卵巢表面，弹性强，有波动感。此期维持 8~12 小时。发情末期直肠检查子宫颈变松软，卵泡壁变薄，动摇很明显，呈熟葡萄状，有一触即破的感觉。此期维持 8~10 小时。